RFLP ja DNA-analyysisovellukset

Rajoitusfragmenttien pituuden polymorfismi (RFLP) on geneettisen analyysin molekyylimenetelmä, jonka avulla yksilöt voidaan tunnistaa ainutlaatuisten restriktioentsyymi leikkaaminen tietyillä DNA-alueilla.

Kutsutaan myös RFLP-analyysi, tekniikka hyödyntää polymorfismit yksittäisten ihmisten geneettisissä koodeissa. Vaikka kaikilla lajin jäsenillä on olennaisesti sama geneettinen rakenne, nämä pienet erot vastaavat fenotyypin, kuten ulkonäön tai aineenvaihdunnan, variaatioita yksilöiden välillä.

RFLP-analyysimenetelmä kattaa tietyn alueen DNA- tunnetulla variaatiolla restriktioentsyymeillä, sitten erottamalla DNA-fragmentit agaroosigeelielektroforeesilla ja määrittämällä fragmenttien lukumäärä ja suhteelliset koot.

Restriktioentsyymi on entsyymi, proteiinimolekyyli, joka leikkaa DNA: ta restriktiokohdissa. Pohjimmiltaan DNA-näyte hajotettiin ja pilkottiin restriktioentsyymeillä. Tuloksena olevat fragmentit erotetaan niiden pituuksien mukaan, ja fragmenttien kokokaavio eroaa jokaisella testatulla yksilöllä.

Koko RFLP-prosessi vaatii koettimen leimaamisen, DNA: n fragmentoinnin, elektroforeesin, blottauksen, hybridisaation, pesun ja autoradiografian. Havaittu RFLP visualisoidaan käyttämällä röntgenfilmiä autoradiografiassa, jossa DNA-fragmentteja voidaan tarkastella ja analysoida sen jälkeen, kun ne on erotettu toisistaan ​​elektroforeesilla.

Joitakin RFLP-analyysin sovelluksia ovat:

• DNA-sormenjälki: Oikeuslääketieteelliset tutkijat voivat käyttää RFLP-analyysiä epäiltyjen tunnistamiseen rikospaikoilta kerättyjen näytteiden perusteella.
• Isyys: RFLP: tä käytetään myös isyyden määrittämiseen tai esi-isien jäljittämiseen.
• Geneettinen monimuotoisuus: Tekniikkaa voidaan käyttää villieläinten evoluution ja muuttotutkimuksen, eläinpopulaatioiden jalostustapojen tutkimiseen sekä tiettyjen sairauksien havaitsemiseen ja diagnosointiin.

Tekniikka, jolla käytetään genomien variaation havaitsemista RFLP: llä, on tärkeä työkalu genomikartoituksessa ja geneettisen sairauden analysoinnissa. Jos tietyn tautigeenin sijaintia etsitään tietystä kromosomista, tutkijat niin tekevät analysoida taudin kanssa perheenjäsenten DNA: ta, etsiä sitten samanlaisia ​​perintökuvioita RFLP: stä alleelit.

Kun sairausgeeni on paikallistettu, RFLP-analyysin suorittaminen muille perheenjäsenille voisi paljastaa mutanttigeenien kantajan tai signaalin kokonaisriskistä. On tärkeää huomata, että RFLP-tekniikkaa ei käytetä laajasti nyt, kun uudempia, vankempia tekniikoita käytetään DNA-analyyseihin oikeuslääketieteessä ja useilla muilla aloilla.

Valitettavasti RFLP-analyysitekniikka on työläs ja hidas. Sen lisäksi, että vaaditaan suuri määrä näytteen DNA: ta - näytteen tulisi yleensä olla noin neljänneksen kokoinen, mikä on suhteellisen suuri DNA-näytteille - prosessi koettimen leimaamisesta pesuun ja autoradiografiaan voi kestää koko kuukauden saattaa loppuun.

Human Genome -projektin tulokset ovat melko paljon korvanneet RFLP-tarpeen. Projekti mahdollisti ihmisen soluista löydetyn DNA: n koko sekvenssin, ihmisen genomin ja kaikkien ihmisen genomin geenien tunnistamisen.