10x TBE-elektroforeesipuskuriprotokolla tai -resepti

TBE ja TAE käytetään puskurina molekyylibiologiassa, pääasiassa elektroforeesi nukleiinihappojen määrä. Tris-puskureita käytetään lievästi emäksisissä pH-olosuhteissa, kuten DNA-elektroforeesissa, koska tämä pitää DNA: n liukenee liuokseen ja deprotonoidaan, joten se kiinnittyy positiiviseen elektrodiin ja siirtyy a: n läpi geeli. EDTA on ainesosa ratkaisussa, koska tämä yleinen kelatoiva aine suojaa nukleiinihappoja entsyymien hajoamiselta. EDTA kelatoi kaksiarvoisia kationeja, jotka ovat kofaktoreita nukleaaseille, jotka voivat saastuttaa näytteen. Koska magnesiumkationi on kuitenkin DNA-polymeraasin ja restriktioentsyymien kofaktori, EDTA-konsentraatio pidetään tarkoituksella alhaisena (noin 1 mM konsentraatio).

Liuosta ei tarvitse steriloida. Vaikka saostumista voi tapahtua tietyn ajan kuluttua, kantaliuos on edelleen käyttökelpoinen. Voit säätää pH: ta pH-mittarilla ja lisäämällä tipoittain väkevää suolahappo (HCl). On hienoa säilyttää TBE-puskuria huoneenlämpötilassa, vaikka saatat haluta suodattaa kantaliuosta 0,22 mikronin suodattimen läpi hiukkasten poistamiseksi, jotka edistäisivät saostumista.

instagram viewer

5X- tai 10X-varastoliuoksen käyttäminen vahingossa antaa huonoja tuloksia, koska niin paljon lämpöä syntyy. Huonon tarkkuuden lisäksi näyte voi vaurioitua.

Vaikka TBE ja TAE ovat yleisiä elektroforeesipuskuria, niitä on muita vaihtoehtoja alhaisen molaarisuuden johtaville liuoksille, mukaan lukien litiumboraattipuskuri ja natriumboraattipuskuri. TBE: n ja TAE: n ongelmana on, että Tris-pohjaiset puskurit rajoittavat sähkökentässä käytettävää sähkökenttää, koska liian suuri varaus aiheuttaa nousevan lämpötilan.

instagram story viewer