Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS) on puskuriliuos sitä käytetään yleisesti immunohistokemiallisessa (IHC) värjäyksessä ja sitä käytetään usein biologisessa tutkimuksessa. PBS on vesipohjainen suolaliuos, joka sisältää natriumvetyfosfaattia, natriumkloridia ja joissain tapauksissa kaliumkloridia ja kaliumdivetyfosfaattia.
Immunohistokemiallinen värjäys
Immunohistokemia tarkoittaa antigeenien, kuten proteiinien, havaitsemisprosessia a-soluissa kudosleikkaus käyttämällä vasta-aineiden periaatetta, joka sitoutuu spesifisesti antigeeneihin biologisissa kudoksia. Immunofluoresoiva värjäys oli ensimmäinen immunohistokemiallinen värjäysmenetelmä.
Antigeenit tulevat näkyviksi konjugoituneina vasta-aineisiin fluoresenssiväriaineilla johtuen antigeeni-vasta-aine sitoutumisreaktio. Tämä prosessi tapahtuu, kun se aktivoituu tietyn aallonpituuden jännittävän valon avulla fluoresoivalla mikroskoopilla.
Liuoksen osmolaarisuus ja ionipitoisuudet vastaavat ihmiskehon vastaavia - ne ovat isotonisia.
Resepti PBS-puskurille
Voit valmistaa PBS: ää useilla tavoilla. Kaavoja on useita. Jotkut niistä eivät sisällä kaliumia, kun taas toiset sisältävät kalsiumia tai magnesium.
Tämä resepti on suhteellisen helppo. Se on 10-kertaiseen PBS-varastoliuokseen (0,1 M). Voit kuitenkin myös tehdä 1X-varastoliuoksen tai aloittaa tällä 10X-reseptilla ja laimentaa sen 1X: ksi. Koko prosessi vie noin 10 minuuttia ja tarjotaan myös mahdollisuus lisätä Tween.
Mitä sinun tulee tehdä PBS-puskurista
- Yksiemäksinen natriumfosfaatti (vedetön)
- Kaksiemäksinen natriumfosfaatti (vedetön)
- Natriumkloridia
- Suorita ja punnitse veneet
- Magneettisekoitin ja sekoituspalkki
- Kalibroitu pH-koetin ja sopivat ratkaisut pH: n säätämiseen
- 1 litran mittapullo
- Tween 20 (valinnainen)
Kuinka tehdä PBS-puskuri
- Punnitaan 10,9 g vedetöntä kaksiemäksistä natriumfosfaattia (Na2HPO4), 3,2 g vedetöntä natriumfosfaattia yksiemäksistä (NaH2PO4) ja 90 g natriumkloridia (NaCl). Liuota vain alle 1 litraan tislattua vettä.
- Säädä pH arvoon 7,4 ja lisää liuos lopulliseen tilavuuteen 1 l.
- Laimenna 10X ennen käyttöä ja säädä pH tarvittaessa uudelleen.
- Voit tehdä PBS-liuoksen, joka sisältää 0,5 prosenttia Tween 20, lisäämällä 5 ml Tween 20 1L liuokseen.
Vinkkejä PBS-puskurin valmistukseen
Säilytä puskuria huoneenlämpötilassa sen jälkeen kun olet valmistanut PBS-liuoksen.
Muut kuin vedettömät reagenssit voidaan korvata, mutta joudut laskemaan uudelleen kunkin sopiva massa lisättyjen vesimolekyylien mahduttamiseksi.
PBS-puskurin käyttö
Fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella on monia käyttötarkoituksia, koska se on isotoninen ja myrkytön useimmille soluille. Sitä voidaan käyttää laimentamaan aineita ja sitä käytetään usein huuhtelemaan solusäiliöitä. PBS: ää voidaan käyttää laimennusaineena useissa menetelmissä biomolekyylien kuivaamiseksi, koska sen sisällä olevat vesimolekyylit rakentuvat esimerkiksi aineen - proteiinin - ympärille. Se "kuivataan" ja immobilisoidaan kiinteälle pinnalle.
PH pysyy vakaana ja tasaisena solujen tuhoutumisen estämiseksi.
Aineeseen sitoutuva ohut vesikalvo estää denaturoitumisen tai muut muodonmuutokset. Karbonaattipuskureita voidaan käyttää samaan tarkoitukseen, mutta vähemmän tehokkaasti.
PBS: ää voidaan käyttää myös vertailuspektrin mittaamiseen proteiini adsorptio ellipsometriassa.