Fosfaattipuskuroitu suolaliuos tai PBS-liuos

PBS tai fosfaattipuskuroidussa suolaliuos on puskuriliuos se on erityisen arvokasta, koska se jäljittelee ihmiskehon nesteiden ionipitoisuuksia, osmolaarisuutta ja pH: ta. Toisin sanoen, se on isotoninen ihmisen ratkaisuille, joten se aiheuttaa vähemmän todennäköisesti soluvaurioita, myrkyllisyyttä tai ei-toivottua saostumista biologisessa, lääketieteellisessä tai biokemiallisessa tutkimuksessa.

PBS-ratkaisun valmistamiseksi on olemassa useita reseptejä. Essentiaalinen liuos sisältää vettä, natriumvetyfosfaattia ja natriumkloridia. Jotkut valmisteet sisältävät kaliumkloridia ja kaliumdivetyfosfaattia. EDTA: ta voidaan lisätä myös solunvalmistuksessa tarttumisen estämiseksi.

Fosfaattipuskuroitu suolaliuos ei ole ihanteellinen käytettäväksi ratkaisuissa jotka sisältävät kaksiarvoiset kationit (Fe²⁺, Zn²⁺), koska sateita voi tapahtua. Jotkut PBS-liuokset sisältävät kuitenkin kalsiumia tai magnesiumia. Muista myös, että fosfaatti voi estää entsymaattisia reaktioita. Ole erityisen tietoinen tästä mahdollisesta haitasta työskennellessäsi DNA: n kanssa. Vaikka PBS on erinomainen fysiologiseen tieteeseen, huomaa, että PBS-puskuroidussa näytteessä oleva fosfaatti voi saostua, jos näytettä sekoitetaan etanoliin.

1X PBS: n tyypillisen kemiallisen koostumuksen loppupitoisuus on 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl ja 2,7 mM KCl. Tässä on reagenssien lopullinen konsentraatio liuoksessa:

Tarkoituksesi mukaan voit valmistaa 1X, 5X tai 10X PBS. Monet ihmiset vain ostavat PBS-puskuritabletteja, liuottavat ne tislattuun veteen ja säätävät pH: n tarpeen mukaan kloorivetyhapolla tai natriumhydroksidia. Ratkaisun tekeminen on kuitenkin helppoa tyhjästä. Tässä on reseptejä 1X- ja 10X-fosfaattipuskuroidulle suolaliuokselle:

1. Liuota reagenssisuolat 800 ml: aan tislattua vettä.
2. Säädä pH halutulle tasolle suolahapolla. Yleensä tämä on 7,4 tai 7,2. Mittaa pH pH-mittarilla, ei pH-paperilla tai muulla epätarkkalla tekniikalla.
3. Lisää tislattua vettä niin, että lopullinen tilavuus on 1 litra.

Sterilointi ei ole välttämätöntä joissakin sovelluksissa, mutta jos steriloit sitä, annostele liuosta alikvootteina ja autoklaavi 20 minuutin ajan 1,05 kg / cm 15 psi: n paineessa.²) tai käytä suodatussterilointia.

Fosfaattipuskuroitu suolaliuos voi olla varastoidaan huoneenlämpötilassa. Se voi olla myös jäähdytetty, mutta 5X- ja 10X-ratkaisut voivat sakka jäähtyessään. Jos joudut jäähdyttämään väkevää liuosta, säilytä sitä ensin huoneenlämpötilassa, kunnes olet varma, että suolat ovat täysin liuenneet. Jos saostumista tapahtuu, lämpötilan lämpeneminen palauttaa ne takaisin liuokseen. Jäähdytetyn liuoksen kestoaika on 1 kuukausi.

10X on väkevöity tai varastoliuos, joka voidaan laimentaa, jotta saadaan 1X tai normaali liuos. 5X-liuos on laimennettava viisi kertaa normaalin laimennuksen tekemiseksi, kun taas 10X-liuos on laimennettava 10 kertaa.

Lisää 100 ml 10X-liuosta 900 ml: aan vettä, kun haluat valmistaa 1 litran 1X PBS: n työliuosta 10X PBS-liuoksesta. Tämä muuttaa vain liuoksen konsentraatiota, ei reagenssien grammaa tai moolimäärää. PH: n ei pitäisi muuttua.

Toinen suosittu puskuriliuos on Dulbeccon fosfaattipuskuroitu suolaliuos tai DPBS. DPBS: ää, kuten PBS: ää, käytetään biologiseen tutkimukseen ja puskureita pH-alueella 7,2 - 7,6. Sitä voidaan varastoida huoneenlämpötilassa. Dulbeccon liuos sisältää pienemmän pitoisuuden fosfaattia. Se on 8,1 mM mM fosfaatti-ioneja, kun taas tavallinen PBS on 10 mM fosfaattia. 1x DPBS: n resepti on:

Liuota suolat 800 ml: aan vettä. Säädä pH arvoon 7,2 - 76 suolahapolla. Säädä lopullinen tilavuus 1000 ml: ksi vedellä. Autoklaavi 121 ° C: ssa 20 minuutin ajan.

• Dulbecco, R.; et ai. (1954). "Plakin muodostuminen ja puhdasten linjojen eristäminen poliomyeliittivirusten avulla". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS.") Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.