TAE-puskuri on liuos, joka koostuu Tris-emäksestä, etikkahaposta ja EDTA: sta (Tris-asetaatti-EDTA). Se on historiallisesti yleisin puskuri, jota käytetään agaroosigeeliin elektroforeesi - tuloksena olevien DNA - tuotteiden analyysissä PCR- vahvistus, DNA- puhdistusprotokollat tai DNA-kloonaus kokeiluja.
Tällä puskurilla on alhainen ionivahvuus ja pieni puskurointikapasiteetti. Se sopii parhaiten suurten (> 20 kiloemäksen) DNA-kappaleiden elektroforeesiin, ja se on vaihdettava usein tai kierrätettävä pidempään (> 4 tuntia) geeli-ajoaikaan. Tätä silmällä pitäen kannattaa ehkä harkita useiden erien puskurin valmistamista.
Koska puskuri on helppo valmistaa ja vaiheet voidaan suorittaa nopeasti, useamman kuin yhden erän valmistus kerrallaan ei saisi olla erityisen aikaa vievää tai vaikeaa. Alla olevien ohjeiden mukaan TAE-puskurin tekeminen vie vain 30 minuuttia.
Mitä tarvitset TAE-puskuriin
Koska TAE-puskurin tekeminen vaatii vain nopeita ja yksinkertaisia ohjeita, siihen tarvittavien materiaalien määrä ei ole liian suuri. Tarvitset vain EDTA (etyleenidiamiinitetraetikkahappo) dinatriumsuolan, Tris-emäksen ja jääetikkahapon.
Puskurin valmistaminen vaatii tarvittaessa myös pH-mittarin ja kalibrointistandardit. Tarvitset myös 600 millilitran ja 1500 millilitran dekantterilaseja tai pulloja sekä mittasylintereitä. Lopuksi tarvitset ionivaihdettua vettä, sekoita tankoja ja sekoita levyjä.
Seuraavissa ohjeissa kaavan paino (kunkin elementin atomimassa kerrotaan atomien lukumäärällä, sitten kummankin massa lisätään yhteen) lyhennetään FW: ksi.
Valmista EDTA: n kantaratkaisu
EDTA-ratkaisu valmistellaan etukäteen. EDTA ei mene kokonaan liuokseksi, ennen kuin pH on asetettu arvoon noin 8,0. 500 millilitran varastolle 0,5 M (molaarisuus tai konsentraatio) EDTA-liuos, punnitsee 93,05 grammaa EDTA-dinatriumsuolaa (FW = 372,2). Liuota se 400 millilitraan deionisoitua vettä ja säädä pH natriumhydroksidilla (NaOH). Täytä liuos lopulliseen tilavuuteen 500 millilitraa.
Luo osakeratkaisusi
Tee väkevä (50x) TAE-kantaliuos punnitsemalla 242 grammaa Tris-emästä (FW = 121,14) ja liuottamalla se noin 750 millilitraan deionisoitua vettä. Lisää varovasti 57,1 millilitraa jäähappoa ja 100 millilitraa 0,5 M EDTA: ta (pH 8,0).
Sen jälkeen säädetään liuos lopulliseen tilavuuteen 1 litra. Tätä kantaliuosta voidaan säilyttää huoneenlämpötilassa. Tämän puskurin pH: ta ei ole säädetty ja sen tulisi olla noin 8,5.
Valmista TAE-puskurin toimintaratkaisu
1x TAE-puskurin työliuos valmistetaan laimentamalla varastoliuos yksinkertaisesti 50x deionisoituun veteen. Lopulliset liuenneen aineen pitoisuudet ovat 40 mM (millimolaarinen) Tris-asetaatti ja 1 mM EDTA. Puskuri on nyt valmis käytettäväksi agaroosigeelin ajamisessa.
Käärimistä
Tarkista inventaario ennen kuin aloitat varmistaaksesi, että sinulla on kaikki yllä olevat materiaalit TAE-puskuria varten. Toimitushenkilöstösi pitäisi pystyä kertomaan, onko heillä kaikki tarvitsemasi tavarat varastossa. Et halua lopulta puuttuu jotain menettelyn keskellä.